Konwencjonalna chromatografia kolumn
2. Kolumna chromatograficzna (typ obrotu)
3. Kolumnachatograficzna kolumna (manualna)
*** CENUT CENY Powyższy, zapytaj nas, abyśmy otrzymali
Opis
Parametry techniczne
Konwencjonalna chromatografia kolumnWykorzystuje różnicę w stosunku dystrybucji różnych substancji między fazą stacjonarną a fazą ruchomą lub różnymi zdolnościami retencyjnymi stałych faz w stosunku do różnych substancji, aby osiągnąć rozdział substancji. Gdy mieszanina przepływa przez kolumnę chromatograficzną z fazą ruchomą, będzie oddziaływać z fazą stacjonarną w kolumnie (takiej jak rozpuszczanie, adsorpcja itp.). Ze względu na różnice we właściwościach fizycznych i chemicznych i strukturach każdego składnika w mieszaninie różnią się również wielkość i wytrzymałość ich interakcji z fazą stacjonarną. Zgodnie z tą samą siłą napędową czas retencji każdego elementu w fazie stacjonarnej jest inny, tak że elementy w mieszaninie wypływają z kolumny w określonej kolejności, osiągając separacja.
Parametr
Wykrywanie pozostałości pestycydów
 |
 |
 |
 |
Często to mówimyKonwencjonalna chromatografia kolumnjest w rzeczywistości separacja chromatografii kolumnowej, znana również jako chromatografia kolumnowa. Został po raz pierwszy wynaleziony i użyty przez rosyjskich naukowców w 1903 roku. Zmiażdżył roztwór pigmentów roślinnych w proszku węglanowym wapnia i znalazł różne pasma kolorów na proszku węglanowym wapnia od góry do dołu. Rozdzielając i ekstrakcję różnych pasm kolorów, uzyskano stosunkowo czysty chlorofil, luteina itp.
Po stu latach rozwoju metoda ta stała się stosunkowo dojrzała, a faza stacjonarna ewoluowała również z pojedynczego proszku węglanowego wapnia do tlenku glinu (który można podzielić na kwaśne, neutralne, alkaliczne, żel krzemionkowy, węgiel aktywowany itp. Żel krzemionkowy jest najczęściej stosowany w głównych laboratoriach, żel faza krzemionki i faza odwrotna!
Faza stacjonarna (żel krzemionkowy) należy ogólnie oczyszczyć i aktywować, a wielkość cząstek powinna być jednolita. Teoretycznie im mniejszy rozmiar cząstek i większy obszar powierzchni na jednostkę masy, tym wyższa zdolność adsorpcji i tym lepszy efekt separacji.
Jednak w praktycznym użyciu, gdy cząsteczki fazy stałej są zbyt małe, często istnieją dwie sytuacje: jedna jest to, że mają lżejszą wagę i łatwo unoszą się w powietrzu (żel krzemionkowy nie może być zdegradowany przez ludzkie ciało, a im bardziej toksyczne jest); Po drugie, małe cząsteczki mogą również prowadzić do małych szczelin między cząsteczkami, co powoduje powolne natężenie przepływu rozpuszczalnika i zużycie czasu; Przykładając silikon jako przykład, największy komercyjnie używany wielkość silikonu wynosi obecnie siatka 200-300.
Pod względem metod przekazywania kolumn, oprócz automatycznego sprzętu do analizy, takich jak przygotowanie krążenia do przodu, wydajne przygotowanie fazy ciekłej i wspomniane wcześniej maszyny do przekazywania kolumn, ręczne podanie kolumny jest głównie podzielone na trzy typy: przejście kolumny ciśnienia atmosferycznego, przepuszczanie kolumny kolumny i podłożenie kolumny i ciśnienie.
Wśród nich depresja za pośrednictwem kolumny powoduje słabą wydajność adsorpcji ze względu na szybki szybkość przepływu Eluent, co prowadzi do utraty większości tac i słabej wydajności separacji. Jest odpowiedni do oddzielania próbek stosunkowo otwartymi płytkami TLC, szczególnie w próbkach z tylko jednym dużym zanieczyszczeniem polarnym w produkcie; Większość czasu spędza na wstępnym obróbce związków, usuwając zanieczyszczenia przed starannym oczyszczeniem. Należy zauważyć, że odparowanie rozpuszczalnika spowodowane przez u podsumowania podczas użytkowania może prowadzić do kondensacji dużej liczby kropel wody na zewnętrznej powierzchni kolumny. Nie należy łatwo podjąć się związków wrażliwych na wodę.
Przekazywanie kolumny ciśnienia atmosferycznego jest najskuteczniejszą metodą separacji wśród trzech, ale ponieważ rozpuszczalnik często porusza się zbyt wolno, nawet najlepszy efekt separacji może wpłynąć na wydajność. Dlatego w tej chwili stosuje się ciśnienie, które nazywa się podaniem kolumny pod ciśnieniem; Ale ciśnienie nie powinno być zbyt wysokie. Zasadniczo do automatycznego działania stosuje się do automatycznego działania kulki podwójnej łańcucha, a pompa rybna jest używana. Oba można zmodyfikować, jak pokazano na zdjęciu.
Konwencjonalny proces przekraczania kolumn:
Prace przygotowawcze powinny być dobrze wykonane:
Wybierając kolumnę, obserwuj, czy istnieje tablica szlifowania. W przypadku kolumn bez szlifowania desek pamiętaj o napełnieniu dna bawełnie. Bawełna nie powinna być zbyt gruba ani zbyt cienka, o ile może blokować schodzenie silikonu. (Bloger bezpośrednio zdemontował wieszak na ubrania i użył go do włożenia bawełny do ujścia na wtyczce)
Przygotuj minimalny eluent polaryzacji, lampa UV (zalecana dla personelu laboratoryjnego, ręcznego, gotowy do zrobienia zdjęcia w dowolnym momencie), w razie potrzeby stojak na rurkę testową!
Wybierz odpowiednią kolumnę, dodaj silikonowy żel, zanurz żel silikonowy i spłaszcz
WybórKonwencjonalna chromatografia kolumnjest bardzo ważny, a ich rozmiar należy obliczyć na podstawie ilości produktu, który można ogólnie podzielić na:
Kilka miligramów kolumny (ostateczny wybór całkowitej syntezy);
Kolumna kilku dziesiątek miligramów (metodologiczny substrat ekspansji);
500 miligramów do 1 gramu kolumny (przy użyciu metodologii jako surowca);
Filary około 5G i większe łuski.
Najczęstszy stosunek średnicy kolumny do wysokości w laboratorium wynosi ogólnie między 1: 2,5 a 1:15. Ilość żelu krzemionkowego stosowanego jako faza stacjonarna podczas ładowania próbki wynosi około 20 do 40 razy większa niż próbka. Standard wyboru kolumn powinien być oparty na sytuacji wspinaczkowej płyty TLC w próbce. Jeśli w bliskiej odległości istnieje wiele zanieczyszczeń, spróbuj wybrać większą kolumnę w jak największym stopniu, aby próbka mogła być pokryta małą cienką warstwą (zalecana grubość poniżej 5 mm). Jeśli zanieczyszczenia są daleko, grubość tej można naturalnie zwiększyć, ale nie zaleca się, aby grubość próbki przekroczyła 2 cm, chyba że produkt jest po prostu umyty.
Wiele osób popełnia błąd, myśląc, że dodanie większej ilości silikonu, nawet jeśli jest on grubszy na mojej próbce, czy można go dobrze rozdzielić? Ta odpowiedź jest negatywna!
Powodem jest to, że ci ludzie nigdy nie sądzili, że próbki poniżej i powyżej nie działały na tej samej linii, więc mogli uzyskać tylko niektóre czyste, z których większość została skrzyżowana, nie wspominając o nieczystej, marnowaniu czasu i rozpuszczalników!
Dlatego próbka wymaga przerzedzenia!
Po wybraniu kolumny dodanie silikonu można wykonać za pomocą lejka żywieniowego. W tym samym czasie noś maskę i działaj w kapturze oparowym. Przyczyna tego nie zostanie opracowana przez blogera (krzemioza).
Jeśli chodzi o infiltrację żelu krzemionkowego, zalecany proces to: Po pierwsze, umieść kolumnę z żelu krzemionkowego z żelem krzemionkowym zainstalowanym pionowo, spłaszcz powierzchnię żelu krzemionkowego ręką, podłącz dno kolumny żelu krzemionkowego z pompą wodną, pompuj żel krzemionkowy, a następnie wlej najmniej polaryjny eluent z góry. Kiedy Eluent ma się wyciekać, zamknij zawór odcinający, aby zapobiec pompowaniu rozpuszczalnika do pompy wodnej.
Następnie, pod ciśnieniem, żel silikonowy można jednolicie przemoczyć, płukając siedem lub ośmiu objętości kolumn z najmniejszą ilością rozwijającego się środka.
Próbka powyżej
Pobieranie próbek jest podzielone na pobieranie próbek na mokro i pobieranie próbek suchego.
(1) Próbkowanie na mokro.
Zalecaną metodą jest użycie pipety z gumową końcówką do ssania próbki, w pobliżu górnej części żelu silikonowego, powoli i równomiernie kapiący próbki, aż pokryje warstwę, a następnie przestanie dodawać próbki i zastosować ciśnienie, aby zanurzyć tłustą substancję do warstwy żelu silikonowego; Zanurz tłustą substancję do warstwy silikonowej i powtórz ten proces wiele razy, aż wszystkie próbki zostaną załadowane!
Niektórzy nowi studenci mogą być ciekawi, dlaczego ta operacja jest przeprowadzana zamiast powlekania mokrego oleju podobnie jak substancja?
W rzeczywistości ta operacja może zmniejszyć efektywną wysokość warstwy próbki. W tym momencie rozpoczęła się chromatografia kolumnowa, a kolejne próbki są jak rozpuszczalniki popychające poprzednie próbki do Adsorb i Desorb w żelu krzemionkowym.
(2) Jak w przypadku próbkowania na sucho.
O ile nie jest to absolutnie konieczne, nie jest to zalecane. Bardziej zaleca się, aby próbki stałe są pobite lub krystalizowane. „Zaleca się pozbawione skrupulatne metody, octan etylu vs. woda, oscylacja ultradźwiękowa pomocna oleju o wysokiej wrzących oleju” i „dzielenie się metodą rekrystalizacji laboratoryjnej”.
Suchy pobieranie próbek na ogół przynosi dwa problemy; Z jednej strony, podczas procesu mieszania próbek, zwiększa się możliwość reakcji między próbką a żelem krzemionkowym ze względu na potrzebę podniesienia temperatury odparowania obrotowego; Z drugiej strony obciążenie suche oznacza, że adsorbenty zostaną wprowadzone do warstwy próbki, zwiększając wysokość warstwy próbki lub rozmiar kolumny, wymagając więcej czasu i więcej rozpuszczalników.
Jeśli nie ma innego wyboru, po prostu wlej adsorbowany proszek powoli do kolumny w celu załadunku, z pewnymi wymaganiami podobnymi do metod mokrych.
Dodaj bezwodny siarczan sodu lub piasku kwarcowego
Aby uniknąć wpływu na warstwę próbki podczas dodawania Eluent, powodując nierównomierność, deformację i wpływającą na wydajność separacji, na warstwie próbki zwykle ułożono warstwę bezwodnego siarczanu sodu lub kwarcowego piasku.
Nasi inżynierowie osobiście wolą leżeć bezwodny siarczan sodu, ponieważ ma on również funkcję suszenia i jest przyjazny dla rozpuszczalników, takich jak dichlorometan, które są podatne na ulatnianie, absorpcję ciepła i kondensację!
Elucja gradientu, pobieranie próbek i kolekcja
Po załadowaniu najpierw spłucz kolumnę małym rozpuszczalnikiem polarnym (rozpuszczalnik, który nie pozwoli na przejście produktu) dla objętości kolumny 2-3 (jedna objętość kolumny jest zdefiniowana jako objętość fazy mobilnej przepływającej i przechodzącej), aby zapewnić jednorodność, a następnie wybrać proporcję elucji.
Jak wybrać Eluent, który przechodzi przez kolumnę?
Stosunek Eluent jest wskaźnikiem, gdy Twój produkt osiąga wartość RF około 0. 2 na płycie TLC
Jest to doświadczenie mycia kolumn, które przeczytałem wiele książek i udostępniłem, a faktyczny proces jest również bardzo podobny. Osobiście wolę zmniejszyć gradient o dwa razy.
Na przykład, jeśli rozpuszczalnikiem wspinaczki TLC jest PE/EA =2: 1, bloger częściej uruchamia elucję gradientową od PE/EA =4: 1 i zakończyć w PE/EA =2: 1, generalnie powoduje lepsze wyniki.
Istnieją również techniki przy zbieraniu Eluent. Możesz najpierw wybrać większą rurkę testową, aby ją odebrać, a gdy TLC zbliża się do punktu docelowego, przejdź na mniejszą rurkę testową. Może to zmniejszyć możliwość otrzymania więcej i uniknąć zanieczyszczeń.
Jeśli napotkasz sytuacje, w których punkty zanieczyszczenia i punkty produktu są blisko siebie, szczególnie te o słabej fluorescencji, pamiętaj, aby nie wywierać nacisk. Zamiast tego zdecyduj się przekazać kolumnę pod normalnym ciśnieniem i zmieniać rurkę za każdym razem, gdy łączy się połowa lub mniej rur, co może również zwiększyć prawdopodobieństwo oczyszczania.
Pamiętaj, aby nie poradzić sobie z filarem w odpowiednim czasie!
Wiele osób ma zwyczaj zakładania, że kolumna została przekazana i wysuszona, gdy nie ma produktu w jednej lub dwóch rur po TLC w późniejszym etapie.
Uświadomiłem sobie tylko, że wydajność była zbyt niska, kiedy ją obliczyłem lub kiedy poszedłem zrobić spektrum, odkryłem, że widmo było nieprawidłowe i nie pominęło niewłaściwego punktu. Żałowałem tego głęboko.
Zaleca się zatem, aby nie spieszyć się z przetworzeniem kolumny po ukończeniu żądanego punktu. Zamiast tego wykonaj jądrowy rezonans magnetyczny, aby dopasować wydajność przed przetwarzaniem.
Jeśli jesteś zajęty lub spieszy się, aby oczyszczyć inne związkiKonwencjonalna chromatografia kolumn, Zaleca się spłukiwanie z wysoką polaryzacją łagodny mieszany rozpuszczalnik i pozostawienie tej części Eluent osobno w celu uzyskania wyników identyfikacji.
Popularne Tagi: Konwencjonalna chromatografia kolumnowa, China konwencjonalna producenci chromatografii kolumnowej, dostawcy, fabryka
Wyślij zapytanie
